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022-66387942現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室研究的細(xì)胞多以原核細(xì)胞、真核細(xì)胞為主,為了獨(dú)立研究某類細(xì)胞,需要抑制其他類型細(xì)胞的增殖,例如養(yǎng)293T時(shí)加青霉素/鏈霉素,抑制潛在的原核細(xì)菌增殖,但又不影響293T的功能。那么你知道該如何選擇實(shí)驗(yàn)抗生素嗎?讓我們一起來看看吧!
一、抗生素機(jī)制:
1. DNA復(fù)制:在DNA聚合酶作用下,DNA自身得到復(fù)制,有絲分裂時(shí)每個(gè)細(xì)胞一套DNA;
2. 轉(zhuǎn)錄、RNA形成過程:在RNA聚合酶催化下,以DNA模板鏈合成RNA的過程,產(chǎn)生mRNA;
3. 蛋白合成過程:mRNA在核糖體中作為模板,tRNA運(yùn)輸氨基酸,合成多肽或者蛋白質(zhì);
4. 細(xì)胞膜完整性:細(xì)胞膜是防止細(xì)胞外物質(zhì)自由進(jìn)入細(xì)胞的屏障,它保證了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定,使各種生化反應(yīng)能夠有序運(yùn)行。
5. 細(xì)胞壁完整性:原核單細(xì)胞生物需要有細(xì)胞壁,細(xì)胞壁位于菌細(xì)胞的最外層,包繞在細(xì)胞膜的周圍,保持細(xì)胞正常形態(tài)不受機(jī)械力、滲透壓失衡造成的細(xì)胞膜破裂。
二、實(shí)驗(yàn)抗生素的選擇
(1)抑制RNA的轉(zhuǎn)錄和DNA復(fù)制:抑制核酸的功能阻止了細(xì)胞分裂/或所需酶的合成,有博來霉素(Zeocin)、利福平(Rifampin)等。
(2)干擾蛋白質(zhì)合成:干擾蛋白質(zhì)的合成中核糖體的組裝,例如競爭結(jié)合大小亞基,抗生素包括四環(huán)素類、鏈霉素、氯霉素(為了增加質(zhì)粒產(chǎn)量使用)、新霉素、慶大霉素、卡那霉素、嘌呤霉素(puromycin)。、抑制真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的有遺傳霉素(G418)。
(3)破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu):一些抗菌素與細(xì)胞的細(xì)胞膜相互作用而影響膜的滲透性,這對(duì)細(xì)胞具有致命的作用。以這種方式作用的抗生素有多粘菌素(polymyxin)、短桿菌素。
(4)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成:抑制細(xì)胞壁的合成會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞破裂死亡,抗生素特征是β-內(nèi)酰胺類抗生素,有氨芐青霉素、卡唑霉素,哺乳動(dòng)物的細(xì)胞例如293T、CHO等沒有細(xì)胞壁,不受這些藥物的影響。
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