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022-66387942碧云天的脂質(zhì)氧化MDA檢測試劑盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)是一種用于測量脂質(zhì)氧化水平的試劑盒。它采用一種基于MDA和硫代ba比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反應(yīng)的顯色方法來產(chǎn)生紅色產(chǎn)物,然后通過比色法對血漿、血清、尿液、動植物組織或細(xì)胞裂解液中的MDA進(jìn)行定量檢測。這種試劑盒被廣泛應(yīng)用于脂質(zhì)氧化水平的檢測。
MDA(丙二醛)是生物體脂質(zhì)氧化的天然產(chǎn)物。當(dāng)動物或植物細(xì)胞經(jīng)受氧化應(yīng)激時(shí),脂質(zhì)氧化便發(fā)生。脂肪酸在氧化過程中會逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括MDA。通過測量MDA的水平,我們可以了解脂質(zhì)氧化的程度,因此MDA的測定被廣泛用作脂質(zhì)氧化水平的指標(biāo)。除了氧化應(yīng)激反應(yīng)外,生物體內(nèi)的其他生化反應(yīng)也會產(chǎn)生MDA,例如thromboxane synthase也能催化其產(chǎn)生,但只要在測定時(shí)設(shè)置適當(dāng)?shù)膶φ?,就能觀察到脂質(zhì)氧化水平的變化。
以碧云天的脂質(zhì)氧化MDA檢測試劑盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)為工具,通過檢測MDA水平,可以準(zhǔn)確評估生物體的脂質(zhì)氧化程度。這種試劑盒符合脂質(zhì)氧化水平檢測的需要,并且在科學(xué)研究和臨床應(yīng)用中得到廣泛應(yīng)用。
使用說明:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 血漿、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測定。
b. 組織或細(xì)胞可以使用PBS裂解液進(jìn)行勻漿或裂解。對于組織,組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%;對于細(xì)胞,每100萬細(xì)胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后,10,000g-12,000g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測定。對于一些特殊樣品,離心不能獲得澄清的上清溶液的,可以使用0.2微米孔徑的過濾器過濾以獲得澄清的樣品溶液。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進(jìn)行操作。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. TBA儲存液的配制:稱取適量TBA,用TBA配制液配制成濃度為0.37%的TBA儲存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制,或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制,最終濃度即為0.37%。TBA配制液需wan全溶解后再使用,可以加熱到70℃以促進(jìn)溶解。TBA儲存液較難溶解,需加熱到70℃,并通過劇烈Vortex以促進(jìn)溶解。配制好的TBA儲存液室溫避光保存,至少3個(gè)月內(nèi)有效。
3. 樣品測定:
a. 在離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入0.1ml勻漿液、裂解液或PBS等適當(dāng)溶液作為空白對照,加入0.1ml上述不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,加入0.1ml樣品用于測定;隨后加入0.2ml MDA檢測工作液。
b. 混勻后,100℃或沸水浴加熱15分鐘。加熱時(shí)務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進(jìn)行加熱注意用重物壓緊離心管蓋;如果使用沸水浴,則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管,或用Parafilm封住離心管口,用針頭刺一小孔。zui方便和準(zhǔn)確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱0.5ml PCR管的PCR儀。
c. 水浴冷卻至室溫,1000g室溫離心10分鐘。取200微升上清加入到96孔板中,隨后用酶標(biāo)儀在532nm測定吸光度。如果不方便測定532nm的吸光度,也可以測定530-540nm之間的吸光度。可以設(shè)定450nm為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
d. MDA含量的計(jì)算:對于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得MDA的摩爾濃度,對于細(xì)胞、或組織樣品,計(jì)算出樣品溶液中的MDA含量后,可以通過單位重量的蛋白含量或組織重量等來表示最初樣品中的MDA含量,例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。
產(chǎn)品選購:
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
S0131S | 脂質(zhì)氧化(MDA)檢測試劑盒 | 100次 |