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一、擴增方式擴增方式一般有兩種，對稱擴增和不對稱擴增。1、對稱擴增使用等量的引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物量隨著PCR循環(huán)呈指數(shù)增長，一般的PCR，使用的都是這種方式。由于TaqDNA聚合酶具有5’-3’外切酶活性，在PCR擴增的過程中會水解探針，導致探針被耗盡，無法用于熔曲分析；若使用抗酶切修飾的探針，可一定程度降低水解，但由于探針阻礙了聚合酶通過，擴增效率會大幅下降。對稱擴增產(chǎn)生的互補雙鏈，會與探針競爭結(jié)合靶序列，不利于探針結(jié)合到靶序列上，熔曲分析可能會出現(xiàn)異常。優(yōu)點：靈敏...

一、病毒滴度病毒的滴度：單位體積(通常為mL)液體中具有生物活性的病毒顆粒數(shù)。滴度是一個病毒自身復(fù)制的數(shù)量概念，可分為物理滴度和感染滴度。物理滴度是指包含病毒基因組的病毒顆粒的濃度，可以通過通過定量PCR對病毒顆粒的基因組拷貝數(shù)進行檢測，也可以通過測定病毒顆粒中的特定蛋白進行定量，但物理滴度未考慮到病毒活性和感染效率，因此是不準確的。感染滴度是指成功轉(zhuǎn)導細胞的病毒顆粒的濃度，須通過細胞感染實驗來測定，如利用定量PCR對細胞中的病毒基因拷貝數(shù)進行檢測，或通過攜帶熒光的病毒感染細...

上次我們分享了IHC未染色或無信號的原因分析，這次讓我們來看看IHC染色不均勻是為什么吧。一、組織切片制備解釋：組織切片薄厚不均勻→建議：更換刀片二、組織固定1.解釋：酒精固定不足會產(chǎn)生偽影；→建議：延長固定時間；嘗試不同的固定液2.解釋：固定延遲導致抗原擴散；建議：立即固定組織；可以考慮使用交聯(lián)固定劑三、脫蠟解釋：脫蠟不wan全→建議：使用新鮮的二甲苯四、抗體兼容性解釋：一抗可能結(jié)合其他抗原上的表位→建議：從多抗切換至單抗；嘗試不同的單抗五、透化解釋：細胞膜被破壞，膜蛋白丟...

IHC未染色或無信號的原因：一、?抗體問題?：抗體與一抗或二抗不兼容、抗體濃度不合適、抗體失效或儲存不當?shù)榷紩е聼o染色。例如，使用抗一抗種屬來源的二抗，確認二抗是否識別一抗的亞型；使用更高濃度的抗體或延長孵育時間；設(shè)置陽性對照，確保抗體仍然有效?。二、?抗原修復(fù)不足?：固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位，導致抗原修復(fù)不足。使用微波或壓力鍋進行抗原修復(fù)，確保使用新鮮配置的修復(fù)液?。三、?樣本處理不當?：樣本存放時間過長、切片制備不當（如脫蠟不ce底）、組織切片干片等都會影響...

一、蛋白芯片簡介?蛋白芯片?是一種高通量的蛋白質(zhì)功能分析檢測技術(shù)，主要用于監(jiān)測蛋白質(zhì)之間的相互作用。其基本原理是將各種蛋白質(zhì)有序地固定于載體上，然后利用標記了特定熒光物質(zhì)的抗體與芯片上的蛋白質(zhì)結(jié)合，通過熒光強度分析蛋白質(zhì)的表達數(shù)量和相互作用關(guān)系?。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通過將已知的蛋白質(zhì)分子固定在固相載體上，然后捕獲與之特異性結(jié)合的待測蛋白質(zhì)。這些待測蛋白質(zhì)可能存在于血清、血漿、尿液等生物樣本中。通過洗滌和純化步驟后，利用熒光掃描儀或激光共聚掃描技術(shù)測定各點的熒光強度...